巴氏殺菌乳是僅以生牛（羊）乳為原料，經(jīng)巴氏 殺菌等工序制得的液體產(chǎn)品。近年來乳品工業(yè) 迅猛發(fā)展，市場上銷售的巴氏殺菌乳品種、規(guī)格頗 多。部分乳品企業(yè)為提高產(chǎn)品的“香”、“濃”，會(huì)使 用香精等添加劑來增強(qiáng)口味。我國現(xiàn)行的食品安全 國家標(biāo)準(zhǔn) ＧＢ 2760－2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對 巴氏殺菌乳做了明確規(guī)定，不得添加任何香精香料， 但目前尚缺乏相應(yīng)的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致監(jiān)管缺項(xiàng)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1．1 儀器、試劑與材料

7890Ａ ／ 7000Ｃ 氣相色譜－三重四極桿質(zhì)譜儀（配 備自動(dòng)進(jìn)樣器和電子轟擊電離源，美國 Ａｇｉｌｅｎｔ 公 司），數(shù)據(jù)采集由 ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ 完成；ＶＯＲＴＥＸ ＫＢ－3 渦旋振蕩器（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公 司）；3－30Ｋ 高速冷凍離心機(jī)（德國 Ｓｉｇｍａ 公司）。 9 種香精標(biāo)準(zhǔn)品：二氫香豆素、香蘭素、香豆素、 乙基香豆素、甲基香豆素、7－甲基香豆素、7－甲氧基 香豆素、7－乙氧基－4 甲基香豆素和環(huán)香豆素（純度＞ 96％，日本 ＴＣＩ 公司）。乙醇、甲醇、乙腈和丙酮（美 國 Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司）；乙二胺－Ｎ－丙基甲硅烷 （ＰＳＡ）（德 國 Ｓｉｇｍａ 公 司）；十八烷基鍵合硅膠 （Ｃ18）（美國 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司）；硫酸鎂、無水硫酸鈉 （成都市科龍化工試劑廠）。

1．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取 9 種香精標(biāo)準(zhǔn)品（10. 0±0. 1）ｍｇ，分 別置于 10 ｍＬ 容量瓶中，加入少許無水乙醇混勻， 待標(biāo)準(zhǔn)品溶解，再加入乙醇定容至 10 ｍＬ，可得 1 ｍｇ ／ ｍＬ 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－20 ℃冰箱中儲(chǔ)存待用。 分別精密移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 100 μＬ，置于 10 ｍＬ 容量瓶中，用乙醇稀釋并定容至 10 ｍＬ，可得 10 μｇ ／ ｍＬ 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于 4 ℃冰箱中儲(chǔ)存待用。

1．3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取液體巴氏殺菌乳 1 ｇ，置于 50 ｍＬ 離 心瓶中，加入 15 ｍＬ 無水乙醇，渦旋 1 ｍｉｎ，低溫離 心（4 ℃，8 000 ｒ ／ ｍｉｎ）5 ｍｉｎ，取 1 ｍＬ 上清液，用 0. 22 μｍ 尼龍濾膜過濾后，上機(jī)檢測。

1．4 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取不含目標(biāo)物的空白巴氏殺菌乳樣品 1 ｇ（精確至 0. 01 ｇ），按 1. 3 節(jié)方法進(jìn)行預(yù)處理得到基質(zhì)提取液。用基質(zhì)提取液作為稀釋溶劑制備基質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1．5 ＧＣ－ＭＳ 條件

色譜柱：ＤＢ－5ＭＳ 柱（30 ｍ × 0. 25 ｍｍ × 0. 25 μｍ，美國 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司）；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣 方式：不分流進(jìn)樣；載氣：氦氣（≥99. 999％）；流量： 1. 0 ｍＬ ／ ｍｉｎ。程序升溫：初始溫度 80 ℃，保持 2 ｍｉｎ，以 10 ℃ ／ ｍｉｎ 的速率升溫至 170 ℃，保 持 1 ｍｉｎ，以 60 ℃ ／ ｍｉｎ 的速率升溫至 270 ℃，保持 10 ｍｉｎ。進(jìn)樣量：1. 0 μＬ。 色 譜－質(zhì) 譜 接 口 溫 度：280 ℃；電 子 轟 擊 電 離 （ＥＩ）源；電子能量：70 ｅＶ；多反應(yīng)監(jiān)測（ＭＲＭ）模 式；溶劑延遲：4 ｍｉｎ。9 種香精化合物的名稱、保留 時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)見表 1。


2 結(jié)果與討論

升溫程序是實(shí)現(xiàn)化合物分離非常重要的氣相色 譜參數(shù)，本實(shí)驗(yàn)考察了在升溫的第一階段不同升溫 速率（5、10 和 20 ℃ ／ ｍｉｎ）對化合物分離效果的影響。當(dāng)?shù)谝浑A段升溫速度為 20 ℃ ／ ｍｉｎ 時(shí)，二氫香 豆素和香蘭素保留時(shí)間相近，兩個(gè)化合物難以分開； 采用 10 ℃ ／ ｍｉｎ 和 5 ℃ ／ ｍｉｎ 兩種升溫速率可實(shí)現(xiàn) 2 種化合物的良好分離，考慮到節(jié)約時(shí)間，升溫速率最 終選擇 10 ℃ ／ ｍｉｎ。三重四極桿質(zhì)譜條件的優(yōu)化參數(shù)一般包括母離 子、子離子以及碰撞能量等。在 ＭＲＭ 參數(shù)優(yōu)化過 程中，先通過全掃描模式選取質(zhì)荷比較大且相對豐 度較高的特征碎片作為母離子，然后將母離子進(jìn)一 步裂解，選取 2 ～ 3 個(gè)離子作為子離子，最后對每一 對母離子／ 子離子以響應(yīng)信號(hào)大小為依據(jù)優(yōu)化碰撞 能量。

3 結(jié)論

本研究采用直接提取－低溫高速離心凈化結(jié)合 ＧＣ－ＭＳ ／ ＭＳ，通過優(yōu)選提取溶劑、提取溶劑體積和儀器參數(shù)，建立了快速定量測定巴氏殺菌乳中 9 種香 精成分的分析方法。方法學(xué)評(píng)價(jià)和實(shí)際樣品檢測結(jié) 果表明，該方法操作簡便，靈敏度高，凈化效果較好， 可用于巴氏殺菌乳中多種香精的檢測。